收藏本站
我的資料
我的訂單
  購物車 (0)  
親,您的購物車空空的喲~
去購物車結算
   
查看手機網站
重慶騰鑫生物技術有限公司
商城分類
  • 常規動物類
    小動物類
    封閉群小鼠
    近交系小鼠
    突變系小鼠
    基因模型小鼠
    大動物類
    封閉群大鼠
    近交系大鼠
    突變系大鼠
    基因模型大鼠
    豚         鼠
    兔       類
    新西蘭兔子
    犬       類
    比   格   犬
  • 實驗動物飼料
    大小鼠飼料
    猴料
    兔料
    犬料
    豬飼料
    豚鼠料
    特殊品系鼠料
    定做加工高脂料
  • 實驗動物墊料
    白楊木墊料
    玉米芯墊料
    SPF級墊料
  • 實驗籠器具
    兔籠具
    大小鼠籠具
    豚鼠籠具
    猴、狗籠具
    實驗設備
  • 動物實驗器械設備
    不銹鋼類
    有機玻璃類
  • 實驗動物玩具系列
  • 其他產品
新聞詳情

小鼠生化位點檢測

發表時間:2019-01-29 15:54
來源:《基礎動物實驗技術與方法》 作者:師長宏 馮秀亮 張海
摘要:乙酸纖維薄膜電泳是生物化學的方法,該技術運用于實驗動物遺傳質量控制只有二十余年的歷史。由于該方法能檢查近20對等位基因,涉及十幾條染色體,利于反映被檢品系的遺傳概貌,所以,目前認為此法靈敏度高,準確性強,檢出速度快,用樣量小,是遺傳檢測諸方法中較為理想的一種。

乙酸纖維薄膜電泳是生物化學的方法,該技術運用于實驗動物遺傳質量控制只有二十余年的歷史。由于該方法能檢查近20對等位基因,涉及十幾條染色體,利于反映被檢品系的遺傳概貌,所以,目前認為此法靈敏度高,準確性強,檢出速度快,用樣量小,是遺傳檢測諸方法中較為理想的一種。

一、實驗器材

1.樣品

(1)血清:用于Es-1和Trf兩位點檢查。

(2)溶血清:用于檢查Hbb、Car-2和Ldr-1位點。

(3)腎勻漿:用于檢查Es-2、Es-3、Idh-1、Mod-1、Akp-1、Pgm-1、Pep-1、Gpd-1、Gpi-1、Ce-2位點。

(4)尿液:一般在早上8~9時取鼠原尿,做一倍稀釋后方可使用,用于Mup-1位點的檢查。

2.緩沖液:略。

3.染色液:略。

4.點樣品一套,電泳儀一臺,電泳槽一個,乙酸纖維薄膜若干張。

5.滴管、管架、直徑10cm培養皿、普通濾紙、燒杯各二個。

二、實驗方法和步驟

1.實驗方法

我們采用的是水平乙酸纖維薄膜電泳法即用普通濾紙做鹽橋,在低溫常壓下的電泳。

2.實驗步驟

(1)把電泳緩沖液加入電泳槽內到紅線位置,鹽橋濾紙對折后用訂書機將其同定在橋架上,然后加蓋置于4℃冰箱或相應冷室里預冷。

(2)從低溫(-20℃)冰箱中取出樣品,于室溫下自然解凍,并同時將乙酸纖維薄膜裁成適當大小投入緩沖液中浸泡濕透。

(3)從緩沖液中取出乙酸纖維薄膜夾于兩張普通濾紙間,用手輕壓濾紙,以吸去薄膜上的多余緩沖液。

(4)樣品解凍后,用彎頭滴管吸取少量樣品液于點樣板上的小方格內,并依序記下樣品號碼,再用點樣刷蘸取適量樣品液點在乙酸纖維薄膜粗糙面距邊緣1.5cm處,之后迅速轉入電泳槽內,按規定方向(緩沖液pH值大于5.6的,樣品的電泳方向是由負極向正極泳動,若pH值小于或等于5.6則由正極向負極泳動)把點上樣的薄膜水平搭在鹽橋上,待調整好位置后加蓋飽和1~2min,接通電泳,選擇適當電壓和電流并按規定時間電泳。

(5)時間到后立即將電壓電流選擇調零和關掉電源,依次取出走完的乙酸纖維薄膜,放入相應的染色液中,染色5min后取出于5%乙酸溶液脫色1~2h,或直到電泳帶背影完全清楚為止,自然風干后,照相或透明等處理,易于長期保存。

三、結果分析

結果分析指的是電泳帶型的確定。我們知道,每個品系都有自己固定的電泳帶型,這個原始的固定電泳帶型稱作該品系的標準型。品系間各位點的標準型有的相同,有的則不同;而品系間生化位點的標志相異對于電泳帶型的確定是很有用的。在實際工作中,由于DBA/2和C57BL兩品系小鼠的多數生化位點標志都不相同,故在生化位點檢查時將其用作確定待知鼠電泳帶型的參照物來使用。

一般在電泳時,總是把待測樣品和已知標準型樣品在同樣條件和同一支持物上走電泳的,這樣待測作品就可與標準型樣品的帶型進行對比了,以此即可確定待測樣品的帶型。例如我們把特測樣品和已知標準的DBA/2和C57BL品系的樣品同時走Car-2電泳,其待測帶型如果跟DBA/2一樣則為b型,若和C57BL的一樣就是a型,要是即同DBA/2,又同C57BL,那么它就是混雜帶型。

注意:對于一個單位來講,第一次檢查應該是全面的,特別是新引進的或新培育的品系更應如此。但如果這個單位已進行過一次全面檢測后,隔一段時間。要對已查過的品系進行再復查時,若做生化位點檢測,可只測臨界位點,即Car-2、MuP-1、Hbb、Es-1、Trf和Es-3。這樣可節省人力和物力。


正規渠道 正品保障
放心購物 貨到付款
多個城市 次日到達
上門換貨 購物無憂

服務保障

正品保證
客戶服務

支付方式

貨到付款
在線支付

商家服務

培訓中心
服務市場

物流配送

免費運送
客運物流
website qrcode

掃碼手機二維碼

在線客服
 
 
——————
熱線電話
023-68721117
website qrcode